کشت بافت در لیلیوم شاید یکی از راحت ترین مراحل را داشته باشد بدون نیاز خاص به تغییرات پیچیده در فرمول محیط کشت یا اضافه کردن مواد اضافی فقط محیط کشت و شکر با مقدار بسیار کم کینتین Kinetin و نفتالین استیک اسید NAA تقریباً از ۰٫۱ میلیگرم تا ۱ میلیگرم از هر کدام به طور مساوی این میزان برای مراحل مختلف کشت لازم نیست تغییر یابد به طوری که ریز نمونه های گره ساقه لیلیوم اورینتال من بعد از ۳ ماه کشت بدون تغییر محیط کشت توانستند هم کالوس و هم پیازچه و هم ریشه تولید کنند .البته ۱۰۰% در صورت واکشت تعداد پیازها بیشتر خواهد بود ولی برای انجام کشت بافت در اتاق شخصی خودم نتیجه خوبی بود و در صورت واکشت چندین باره احتمال آلودگی هم بیشتر خواهد بود چون محیط اتاق استریل نیست .

ریز نمونه هایی که برای کشت بافت لیلیوم می توانید استفاده کنید عبارتند از :

1. دم گل : قسمتی که به ساقه متصل است
2. گره ها : قسمتی که برگهای ساقه از انجا رشد می کنند و برگهایی که به گل منتهی می شوند.
3. پرچم ها
4. مادگی و تخمدان
5. میله پرچم
6. دم برگ
7. فلس

استفاده از این ریزنمونه ها می تواند باعث موفقیت در کشت بافت لیلیوم شود البته فلس اصلا ریزنمونه خوبی برای افراد مبتدی نیست حتی برای افراد حرفه ای نیز بسیار سخت است که فلس ها را استریل کنند .در اخرین تلاش برای کشت بافت رقم Miss Freya از طریق فلس با وجود استریل کردن قطعات فلس بعد از ۴ یا ۵ روز تمامی ریزنمونه ها آلودگی قارچی را در بروز دادند .رقم Miss Freya یک رقم اورینپت یا هیبرید بین گونه ای و تتراپلوئید می باشد بسیار به بیماری های مربوط به پیاز لیلیوم مقاوم می باشد ولی سرعت تکثیر ان بسیار کند می باشد در طی زمانی که فلس بقیه پیازهای ضعیف و قوی پیازچه تشکیل داده است تمامی فلس های این رقم هنوز بدون فعالیت باقی مانده اند .محیط کشت هایی که می توانید برای کشت بافت لیلیوم استفاده کنید محیط کشت MS و LS و B5 یا گامبورگ می باشند که می توانید با فرمول عادی یا نصف فرمول این محیط های کشت نیز اقدام به کشت بافت لیلیوم بکنید .هورمون ها هم همانگونه که ذکر شد ۰٫۱ میلیگرم تا ۱ میلیگرم NAA و Kinetin به صورت برابر نتیجه قابل قبولی را برای شما به ارمغان می اورد .از لیلیوم های شاخه بریده موجود در بازار نیز می توانید استفاده کنید فقط سعی کنید گل شاخه بریده در وضعیت خوبی باشد و بهتر است انهایی که گلهای بسته بیشتری دارند و تازه تر هستند برای کشت بافت استفاده کنید .اینطوری درصد موفقیت بیشتر خواهد بود و بافت های کشت شده توانایی بیشتری برای برگشت از تمایز خواهند داشت .برای اطمینان از تمیز بودن بهتر است دسته گل را در اب برای یک یا دو روز نگهداری کنید و در طی این مدت قسمت هایی که می خواهید کشت کنید با قارچ کش مناسب اسپری کنید .بزرگترین دشمن کشت بافت از نظر من قارچ ها هستند و نه باکتری ها چون می شود بافت الوده به باکتری را حتی بعد از کشت در محیط کشت دوباره استریل کرد و باکتری ها را از بین برد ولی این مسئله در مورد قارچ ها بسیار سخت است و تقریباً نمی شود اسپور انها را کاملاً از بین برد .

روشی که در برخی موارد برای از بین بردن اسپور قارچها وجود دارد گزاشتن ریزنمونه در محیط کشت با ۳ درصد ساکاروز برای ۲۴ تا ۴۸ ساعت است تا اسپور قارچها جوانه زده و سپس دوباره ریزنمونه را با قارچکش استریل کرد و ریز نمونه را در محیط کشت جدید کشت کرد .در صورت استفاده از قسمت های هوایی لیلیوم برای کشت بافت این مراحل مورد نیاز نیست چون این قسمت ها آلودگی کمتری دارند و مراحل شستشو را نیز به خوبی تحمل می کنند .

در برخی مواقع ریز نمونه گره بدون تولید کالوس مستقیماً جنین زایی می کند این خصوصیت در لیلیوم ها به طور طبیعی وجود دارد ولی به غیر از لیلیوم لنسیفولیوم ( لیلیوم تایگر) در بقیه انواع به صورت پنهان باقی می ماند و بدون تحریک پیازچه از این قسمت ها رشد نمی کند .برای تحریک تولید پیازچه از گره های ساقه در گلهایی کاشته شده می توانید از هورمون NAA به صورت اسپری بر روی ساقه به مدت حداقل یک ماه به مقدار ۵۰۰میلیگرم در لیتر در مراحل ابتدایی رشد و قبل از رشد غنچه ها استفاده کنید .در این صورت تولید گل با مشکل کاهش میابد و گلها کوچکتر خواهند بود ولی پیازچه ها از گره های موجود در ساقه رشد خواهد کرد .از این پیازچه ها می توانید برای کشت بافت استفاده کنید چون در تماس با خاک نبوده اند و تمیزتر هستند .

در این تصاویر ریزنمونه گره ای که من استفاده کرده ام و قسمت هایی که می توانید برای کشت بافت استفاده کنید علامت گزاری شده اند .

موفقیت در کشت بافت به خود شما بستگی دارد .

Related Images: